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腔肠素v图片
产品货号:
KM0084
中文名称:
腔肠素v
英文名称:
Coelenterazine v
产品规格:
500μg|2×500μg
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
腔肠素(Coelenterazine)是在水生生物中发现的一种发光基团(luminophore),是许多荧光素酶的作用底物,包括海肾荧光素酶(Renilla reniformis luciferase,Rluc),分泌型膜锚定荧光素酶(Gaussia luciferase,Gluc)和薮枝虫荧光素酶(Obelia luciferase),和发光蛋白包括水母发光蛋白(Aequorin)的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶,在含分子氧的条件下,氧化腔肠素产生高能量的中间产物,在此过程发射蓝色光,光波长在450~480nm。而甲虫(或萤火虫)荧光素/荧光素酶(FLuc)系统不同,其在含分子氧的条件下,还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光,光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异,RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究,或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛,包括:
1.活细胞或组织的钙离子检测;
2.细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子(活性氧,ROS)化学发光检测;
3.基因报告基因检测;
4.动物活体检测;
5.ELISA和生物发光共振能量转移(BRET)用于蛋白相互作用研究;
6.药物高通量筛选(HTS);

天然腔肠素是自然界中存在最丰富的一种腔肠素,也是目前应用最普遍的一种标准底物。不仅是脱辅基水母发光蛋白(APO)的底物,也是海肾荧光素酶(Rluc)和分泌型膜锚定荧光素酶(Gluc)等荧光素酶的作用底物。前者用于检测钙离子浓度,后者用作荧光素酶的报告基因检测系统。还可用于生物共振能量转移BRET,细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平(ROS)的化学发光检测等。

腔肠素v(Coelenterazine v)是天然腔肠素的一种合成衍生物,多带一个苄基环。CTZ-v具有一独特的特性,能够将野生型海肾荧光素酶(wt RLuc),RLuc8和绿色海肾荧光素酶(Green RLuc)的发射光谱迁移到更长波长。

主要参数:
分子式:C28H21N3O3
分子量:447.48g/mol
纯度:≥93%
外观:浅黄色粉末
结构式:
腔肠素v结构式
保存:-20℃干燥避光保存,且保存于惰性气体内。至少一年有效。

使用方法:
最好在荧光计分析或实验前马上配制新鲜的腔肠素溶液。

1.将低温保存的冻干粉置于-20℃回至室温,低温保存的溶剂用微量恒温仪(heat block)回至室温,之后进行短暂低速离心,使得管内组分都落到底部。
2.往500μg腔肠素v内加入1ml专用的腔肠素溶剂,可用微量恒温仪加热到70℃促进粉末完全溶解,混匀后即得到0.5mg/ml储存液。
  注意:不要用水浴锅加热,因溶液吸潮后会引起腔肠素v的快速降解。
3.用PBS或TBS稀释储存液到所需的水溶性工作液(比如,若荧光计测定所需的浓度为50μM,加447.5μl(0.5mg/ml)到10ml PBS)。
  注意:工作液现配现用,不可保存。
4.腔肠素v储存液置于-80℃避光保存,避免反复冻融,有条件的话保存在氮气或氩气内。尽快用完。当储存液颜色变为深棕色/黑色,请勿继续使用,这表明药物完全降解(氧化)。

附录1天然腔肠素及其衍生物的光谱特性
产品名称货号Em(nm)RLC1Relative
Intensity
Half-rise
time(ms)
天然腔肠素KM0051466116-30
腔肠素hKM00974660.75166-30
腔肠素400 aKM0094400///
腔肠素hcpKM00914450.655002-5
腔肠素cpKM00904420.63282-5
腔肠素fKM00924720.8206-30
腔肠素nKM00894680.250.156-30
腔肠素eKM0093405?& 4650.540.15-0.3

①RLC = relative luminescence capacity:Total time-integrated emission of aequorin in saturating Ca2+relative to native aequorin = 1.0.
②Ratio of the luminescence of aequorin reconstituted with coelenterazine analog relative to native aequorin at 100 nM Ca2+.
③Half-Rise Time:The half-rise time is the time for the luminescence signal to reach 50%of the maximum after addition of 1mMCa2+to a standard of aequorin reconstituted with the coelenterazine analog of interest.

附录2天然腔肠素及其衍生物的应用差异
产品名称货号应用特征
天然腔肠素KM0051应用非常广泛的标准底物。腔肠素是天然水母发光蛋白复合物的发光基团,也是海肾荧光素酶的底物。底物的快速再生比较重要的实验推荐使用天然腔肠素。
1)生物发光检测钙离子的灵敏度非常高,检测范围从0.1μM到>100μM;
2)使用腔肠素监测报告基因表达是其主要应用;
3)其他应用包括生物共振能量转移BRET,化学发光检测细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平(ROS)。
腔肠素hKM00971)腔肠素h形成的水母发光蛋白复合物比天然腔肠素复合物的光强度高10倍以上;
2)比天然腔肠素对钙离子敏感度更高;
3)也适用报告基因分析。
腔肠素400 aKM0094也称为DeepBlue C,是一种腔肠素衍生物,用作海肾荧光素酶Rluc的底物,发射峰约400nm。含GFP受体的BRET研究是Rluc的首选底物,因其对GFP受体的发射波干扰非常小。不可用作Gluc底物。
腔肠素hcpKM0091其生物发光强度最高(腔肠素hcp形成水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍),对Ca2+反应速度快。
腔肠素cpKM0090腔肠素cp产生水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的15倍,且具有更快的Ca2+反应性。
腔肠素fKM0092腔肠素f形成的水母发光蛋白复合物的光强度是天然腔肠素复合物的20倍,最大发射波长约长8nm。具有最好的细胞渗透性。当需要具极高钙离子Ca2+灵敏度的水母发光蛋白复合物,建议用腔肠素f。
腔肠素nKM0089所有的腔肠素衍生物中荧光强度最弱,对Ca2+反应时间明显慢于天然腔肠素。一种非常有用的低灵敏腔肠素。
腔肠素eKM0093体外水母发光蛋白再生中腔肠素e的速度最高,具有双发射峰,分别为405nm和465nm,使其能在pCa 5-7范围内通过双发射峰荧光强度比率的方式测定Ca2+浓度,提高检测准确度。但由于渗透性差,不适合胞内应用。在溶液中稳定性差。

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